ATP生物發(fā)光技術(shù)快速檢測(cè)水中細(xì)菌的研究
目的：探索利用ATP生物發(fā)光技術(shù)測(cè)定水中細(xì)菌量的可行性。
方法：利用生物發(fā)光技術(shù)測(cè)定細(xì)菌中ATP量，根據(jù)細(xì)菌中ATP量與細(xì)菌數(shù)成正比這一原理，推算出水中菌落總數(shù)，于國(guó)標(biāo)平皿計(jì)數(shù)法進(jìn)行對(duì)比、分析兩者之間的相關(guān)性。
結(jié)果：檢測(cè)結(jié)果與傳統(tǒng)國(guó)標(biāo)法有很好的相關(guān)性。結(jié)論：利用生物發(fā)光技術(shù)測(cè)定細(xì)菌中ATP量，檢測(cè)結(jié)果與傳統(tǒng)國(guó)標(biāo)法有很好的相關(guān)性，具有準(zhǔn)確、便利、快捷等特點(diǎn)。
水中菌落總數(shù)的測(cè)定是水質(zhì)監(jiān)測(cè)的一項(xiàng)重要指標(biāo)，它直接反映水的細(xì)菌污染程度。水質(zhì)的好壞與人們的生活密切相關(guān)。目前的水菌落總數(shù)測(cè)定采用國(guó)標(biāo)平皿計(jì)數(shù)法即37℃恒溫培養(yǎng)48±2小時(shí)，這種方法耗時(shí)長(zhǎng)且程序復(fù)雜，不利于水質(zhì)的即時(shí)監(jiān)測(cè)。因此，確定一套快速有效的菌落總數(shù)測(cè)定方法成為未來(lái)水質(zhì)監(jiān)測(cè)的發(fā)展方向。
ATP生物發(fā)光法是利用生物發(fā)光技術(shù)測(cè)定細(xì)菌中ATP量，利用細(xì)菌中ATP量與細(xì)菌數(shù)成正比這一原理，推算出菌落總數(shù)。這種方法不需要培養(yǎng)過(guò)程，操作簡(jiǎn)便，15至20分鐘內(nèi)即可完成，檢測(cè)結(jié)果與傳統(tǒng)國(guó)標(biāo)法有很好的相關(guān)性。
1.材料與方法
1.1 儀器與試劑
ATP生物發(fā)光快速檢測(cè)系統(tǒng)配套儀器及試劑；所有試劑均在有效期內(nèi)使用。
發(fā)光反應(yīng)試劑（LLR）、細(xì)菌細(xì)胞ATP釋放試劑（XRA）、體細(xì)胞ATP釋放試劑（TRA）。
1.2 樣品來(lái)源
取自沈陽(yáng)市市郊丁香湖水
1.3 樣品制備
將水樣用磷酸鹽緩沖液稀釋到實(shí)驗(yàn)所需濃度
1.4 國(guó)標(biāo)法平皿計(jì)數(shù)
將水樣稀釋液培養(yǎng)（營(yíng)養(yǎng)瓊脂，37℃，48小時(shí)）并計(jì)數(shù)。
1.5 ATP檢測(cè)方法
操作步驟如下：①抽取1ml用磷酸鹽緩沖液稀釋的水樣，用專用濃縮器通過(guò)過(guò)濾比色杯濃縮，使水樣中的細(xì)菌細(xì)胞、體細(xì)胞及其它雜質(zhì)附集在過(guò)濾比色杯的濾膜上。②將過(guò)濾比色杯置于有專用吸水濾紙的比色杯架上，向比色杯中滴加4滴TRA，使體細(xì)胞中ATP釋放出來(lái)，用專用加壓器加壓排除反應(yīng)液。③重復(fù)②步驟，使樣品中的外源ATP充分排除。④從比色杯架上取下過(guò)濾比色杯，將其放入微量光度計(jì)的抽屜中，再向過(guò)濾比色杯中加入2滴XRA，使細(xì)菌細(xì)胞ATP釋放。⑤用移液槍抽取50μlLLR加入過(guò)濾比色杯中抽吸兩次后，迅速將抽屜推入微量光度計(jì)中，測(cè)其發(fā)光值RLU。⑥每個(gè)稀釋水樣平行測(cè)定兩次，取平均值。
2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
平皿計(jì)數(shù)結(jié)果與發(fā)光值RLU結(jié)果比較，見表1
稀釋倍數(shù)
RLU(1ml濃縮)
平皿計(jì)數(shù)(cfu/ml)
1 2 平均值
lgRLU 1 2
平均值
|